| 牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定 |
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| 引用本文： | 布日额,王金良,吴金花,孙立杰,锡林高娃,董林.牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定[J].中国兽医学报,2018(3). |
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| 作者姓名： | 布日额 王金良 吴金花 孙立杰 锡林高娃 董林 |
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| 作者单位： | 内蒙古民族大学生命科学学院;内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心;内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所;山东省滨州畜牧兽医研究院; |
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| 摘 要： | 利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。
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| 关 键 词： | 无乳链球菌 菌毛岛屿 AP1、AP2 串联表达 |
Tandem expression for the main antigenic domain of the AP1 and AP2 ancillary protein in pilus insland of Streptococcus agalactiae and the identification of immune activity |
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