苹果花粉中与花柱S-RNase互作的γ–硫堇筛选及鉴定

 以‘国光’苹果（S1S2）花粉为材料，成功构建了酵母pGADT7-cDNA文库，转化效率约为1.2 × 106 · μg-1，插入片段大小在300 ~ 2 000 bp之间。通过酵母双杂交方法，用苹果S2-RNase的C2HVC3区筛选文库获得一个长505 bp的cDNA片段，经分析发现该cDNA序列上有一个261 bp的开放阅读框（ORF），该ORF编码一个具N端信号肽的多肽，该成熟多肽由64个氨基酸组成，富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸，其C端有8个半胱氨酸和一个γ–硫堇功能域，结构预测显示其具有一个α螺旋，3个β折叠，4个二硫键，由此，推断其为苹果γ–硫堇，命名为MdD1。RT-PCR分析发现：MdD1基因在‘国光’苹果叶片、萼片、花瓣、子房、花药和花柱等组织中都有表达，但花药中表达量最高。酵母双杂交结果表明MdD1除了与苹果S2-RNase的C2HVC3区互作外，还与S1-RNase的C2HVC3区，S1、S2-RNase的成熟多肽区存在互作。初步认为：苹果γ–硫堇可能通过与S-RNase非特异性互作，作为花粉非S因子参与自交不亲和反应。