拟南芥MAPKKK16酵母双杂交诱饵载体的构建及毒性和自激活效应检测

前期研究发现,橡胶树MAPKKK基因与抗寒相关。通过同源比对发现,拟南芥MAPKKK16与橡胶树抗寒基因MAPKKK高度同源,但拟南芥MAPKKK16的功能及其调控机制仍不清楚。为了筛选拟南芥MAPKKK16基因的互作蛋白,利用PCR技术从拟南芥基因组DNA中扩增出拟南芥MAPKKK16基因的目的片段,随后亚克隆到pGBKT7表达载体,通过菌液PCR和测序鉴定序列正确后,将重组质粒pGBKT7-MAPKKK16质粒转化至酵母Y2HGold感受态细胞中,检测到诱饵蛋白无毒性且无自主激活报告基因的功能。本研究为后续筛选MAPKKK16互作蛋白,以及为进一步研究该激酶在植物抗寒机制中的作用打下基础。