| 大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达 |
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| 引用本文： | 许崇波,卫广森,王卓,于凤芹,冯书章,王文成,马成国,李尚波,张万林.大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达[J].畜牧兽医学报,1999,30(3):249-253. |
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| 作者姓名： | 许崇波 卫广森 王卓 于凤芹 冯书章 王文成 马成国 李尚波 张万林 |
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| 作者单位： | 中国人民解放军农牧大学军事兽医研究所，辽宁省益康生物制品厂 |
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| 摘 要： | 用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因的质粒ｐＸＳＬＴ１，回收０８４ｋｂ的ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因，再将载体ｐＥＴ—２８ｂ（＋）用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，然后将其与ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因连接，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ酶切反应鉴定重组子质粒，得到了理想重组质粒ｐＸＥＴＳＬＴ１。重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后，其表达产物经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测，结果表明重组菌株可以高效表达ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白，该融合蛋白占菌体总蛋白的３３２１％，而且无天然ＳＴ１生物毒性。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌，ST_1-LT_B融合基因，融合蛋白，表达 |
HIGHLEVELEXRESSIONOFFUSIONGENEOF ESCHERICHIACOLI HEATSTABLEENTEROTOXIN(ST1)ANDHEATLABILEENTEROTOXINBSUBUINT(LTB) |
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| Author XuChongbo,WeiGuangsen,WangZhuoetal.HIGHLEVELEXRESSIONOFFUSIONGENEOF ESCHERICHIACOLI HEATSTABLEENTEROTOXIN(ST1)ANDHEATLABILEENTEROTOXINBSUBUINT(LTB)[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,1999,30(3):249-253. |
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| Authors: | Author XuChongbo WeiGuangsen WangZhuoetal |
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| Abstract: | WeusedrestrictionendonucleasesEcoRandHindtocleave08kb Ecoli ST1LTBfusiongenefromplasmidpXSLT1,isolatedby15%agarosegelelectrophoresis,recovered084kbgenefragment,theninserteditintoanexpressionvectorpET28b( )whichcleavedwithEcoRandHindbybluntendligationTherecombinantplasmidpXETSLT1wasstudiedindetailbyrestrictionendonucleaseanalysisTheresultshaveshownthattherecombinantplasmidcarriedST1LTBfusiongeneBytransformationof Ecoli BL21(DE3),wegot Ecoli BL21(DE3)(pXETSLT1)TherecombinantstraincouldproducepreST1LTBfusionproteinbyELISAandSDSPAGE,andthefusionproteinwasnontoxicAfterrecombinatstrainwasinducedbyIPTG,itsexpressedproductwasabout3321%oftotalcellularproteinbySDSPAGEandthinlayergelscanninganalysis |
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| Keywords: | Escherichiacoli WTBZHeatstableenterotoxin HeatLabileenterotoxinBsubunit Fusiongene Fusionprotein Expression |
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