柠檬酸钠对脱氮假单胞杆菌发酵产维生素B_(12)代谢过程的影响

以脱氮假单胞杆菌为生产菌,研究了柠檬酸钠对其发酵过程中产维生素B_(12)的代谢调控作用。通过摇瓶培养的方式,在基础培养基中添加不同质量浓度的柠檬酸钠,利用分光光度法和HPLC法分别测定了关键酶活和有机酸等含量。结果表明,添加质量浓度为0.3%的柠檬酸钠最有利于维生素B_(12)的发酵,其产量高达45.73μg/mL。在此基础上,结合有机酸和酶学方法,进一步研究发现,外源添加柠檬酸钠能显著降低菌体柠檬酸和琥珀酸的积累,并且加速苹果酸的消耗,降低EMP途径中丙酮酸激酶和磷酸果糖激酶的活力,提高HMP途径中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活力,从而避免发酵液pH急剧下降,减少EMP途径的通量,增加HMP途径的通量,为维生素B_(12)的合成提供充足的还原力NADPH,提高维生素B_(12)发酵产量。