鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 袁晓琴,陈仕怡,刘梦茜,李春燕,许丽惠,周五朵,吴异健,王全溪.鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备[J].江西农业大学学报,2018(1). |
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作者姓名: | 袁晓琴 陈仕怡 刘梦茜 李春燕 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 |
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作者单位: | 福建农林大学动物科学学院; |
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摘 要: | 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni~(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。
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