| 摘 要： | 以含有Cry 3 Aa基因的重组质粒pBCC3为基础,利用PCR和DNA重组技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Cry 3 Aa,将其正向插入载体pCAMBIA1305的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Cry 3 Aa植物表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105。采用农杆菌介导的遗传转化法,将Cry 3 Aa基因转入已转Cry 1 Ac+API基因的741毛白杨无性系pB29中,获得转双Bt基因的741杨。在含潮霉素的培养基中进行多次继代筛选,获得抗性稳定的无性系9个,编号为pCCA1-pCCA9。采用特异引物分别对转基因植株进行PCR检测,结果显示Cry 1 Ac基因稳定存在于pB29中,Cry 3 Aa基因已整合到各无性系的基因组DNA中。ELISA毒蛋白检测,转基因株系都有Cry 1 Ac和 Cry3Aa 杀虫蛋白表达。用转基因植株叶片进行柳蓝叶甲(鞘翅目)和美国白蛾(鳞翅目)室内饲虫试验结果表明,转基因植株具有双抗性。根据对测试昆虫的致死率划分高中低3个抗性水平,其中pCCA2,pCCA5,pCCA6,pCCA9 具有双高抗; pCCA3,pCCA4和pCCA7 对柳蓝叶甲表现出中、低抗性,对美国白蛾则高抗; 而pCCA1 表现对美国白蛾的极低抗性,对柳蓝叶甲则高抗。
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