梭梭HabHLH74转录因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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引用本文: | 王力伟,赵沛义,王朝,房永雨,刘红葵,郭慧琴,王蕴华,何江峰.梭梭HabHLH74转录因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J].畜牧与饲料科学,2020,41(5):13-18. |
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作者姓名: | 王力伟 赵沛义 王朝 房永雨 刘红葵 郭慧琴 王蕴华 何江峰 |
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作者单位: | 内蒙古自治区农牧业科学院,内蒙古 呼和浩特010031;内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古 呼和浩特010011 |
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基金项目: | 创新基金;内蒙古自治区自然科学基金;内蒙古自治区科技重大专项 |
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摘 要: | 利用分子生物学技术从梭梭中克隆了HabHLH74转录因子基因, 在大肠杆菌中表达HabHLH74蛋白, 旨在为梭梭抗逆分子机理提供研究基础。研究结果表明:①利用RT-PCR技术成功扩增了HabHLH74的完整编码区cDNA序列, HabHLH74编码区cDNA序列长度为1 218 bp。根据HabHLH74编码区序列预测出其编码蛋白的理化性质。②成功构建了HabHLH74基因的原核表达载体pET28a(+)-HabHLH74, 并在大肠杆菌中成功表达了梭梭HabHLH74蛋白, 其分子量为43.6 kDa。③对诱导条件进行单因素试验后获得的最佳诱导表达条件:诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L, 诱导温度为37 ℃, 诱导时间为6 h。④对在优化条件下诱导后的菌体进行超声破碎后发现梭梭HabHLH74蛋白主要以包涵体形式存在;降低诱导温度(16 ℃、25 ℃诱导)未能得到可溶性表达的梭梭HabHLH74蛋白。
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关 键 词: | 梭梭 HabHLH74转录因子 克隆 原核表达 |
收稿时间: | 2020-07-07 |
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