| J亚群禽白血病Hrb-1分离株env基因克隆及gp85杆状病毒表达载体的构建 |
| |
| 作者姓名： | 付朝阳 宋素泉 高宏雷 王笑梅 郭艳 王英 张厚双 尹训南 童光志 |
| |
| 作者单位： | 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001 |
| |
| 摘 要： | 自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT-PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS-103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取质粒分别用HindⅢ,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定,得到了阳性重组质粒pMD18-T-Hrb-1/env,对其进行Pst Ⅰ酶切,回收包含J亚群禽白血病病毒株Hrb-1 gp85基因的997bp片段,应用Bac to Bac杆状病毒表达系统,将外源片段与线性化的杆状病毒载体pFast Bac HTA进行连接,获得重组载体pFAST BacHTA/gp85,将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得了杆状病毒重组载体Bacmid/gp85,为表达gp85并建立适于国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础.
|
| 关 键 词： | J亚群禽白血病病毒gp85基因 克隆 载体构建 杆状病毒表达系统 |
| 文章编号： | 1008-0589(2004)02-0081-05 |
| 修稿时间： | 2003-06-17 |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
