| 用合成多肽为半抗原制备Bt Cry1Ab的单克隆抗体 |
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| 引用本文： | 胡小元,张岐蜀,段伟,姜国华,李玲.用合成多肽为半抗原制备Bt Cry1Ab的单克隆抗体[J].农业生物技术学报,2013,21(4):475-482. |
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| 作者姓名： | 胡小元 张岐蜀 段伟 姜国华 李玲 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院生物技术研究所,北京,100081 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项，中国农业科学院生物技术研究所基本科研业务费专项资金 |
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| 摘 要： | 由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac晶体蛋白之间具有很高的同源性(82%~90%),采用常规的单抗制备方法很难制取特异性强的Bt Cry1Ab单抗,为了制备抗Bt Cry1Ab蛋白的特异性单克隆抗体(MAB),本研究从NCBI获得了Bt Cry1Ab蛋白的氨基酸序列,根据ANTHEPORT和DNAStar软件对其抗原性、亲水性和表位性分析结果选定BtCry1Ab特异性肽段进行人工合成,并将其偶联于匙孔血蓝蛋白(KLH)免疫动物,应用细胞融合技术制备了抗该肽段的杂交瘤细胞22株。通过ELISA试验从中筛选出与Bt Cry1Ab天然蛋白产生特异性反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株一株(3A10)。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1型;轻链属κ型;杂交瘤细胞株染色体数目为89~108条;用其制作的腹水对Bt Cry1Ab合成肽的反应效价为1∶1×107;对Bt Cry1Ab天然蛋白的反应效价为1∶1×104;纯化后的抗体对Bt Cry1Ab合成肽的效价为1∶1×108;对Bt Cry1Ab天然蛋白的效价为1∶2×104。抗体的相对亲和力为0.5μg/mL,对Bt Cry1Ab蛋白的最低可检测值为10ng/mL。ELISA结果显示,3A10杂交瘤细胞株所分泌的MAB能特异性识别合成肽和Bt Cry1Ab蛋白,而对同源的Cry1Ac和Cry1Aa蛋白无交叉反应;本研究所制备的Bt Cry1Ab单克隆抗体能够对常规棉和抗虫棉(Gossypium hirsutumL.)进行有效的区分,并且能特异性的识别其中的Bt Cry1Ab蛋白。
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| 关 键 词： | Bt Cry1Ab 单克隆抗体 合成肽 |
Preparation of the Monoclonal Antibody Against Bt Cry1Ab by Using Synthetic Peptide as Hapten |
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| HU Xiao-Yuan
,
ZHANG Qi-Shu
,
DUAN Wei
,
JIANG Guo-Hua
,
LI Ling.Preparation of the Monoclonal Antibody Against Bt Cry1Ab by Using Synthetic Peptide as Hapten[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2013,21(4):475-482. |
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| Authors: | HU Xiao-Yuan ZHANG Qi-Shu DUAN Wei JIANG Guo-Hua LI Ling |
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| Institution: | HU Xiao-Yuan ZHANG Qi-Shu DUAN Wei JIANG Guo-Hua* LI Ling Biotechnology Research Institute, Chines Academy of Agriculture Sciences, Beijing 100081, China |
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