| 奶牛硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)启动子的克隆及活性分析 |
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| 引用本文： | 韩立强,曹菁菁,付彤,魏占勇,王亚宾,杨国宇. 奶牛硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)启动子的克隆及活性分析[J]. 农业生物技术学报, 2013, 21(4): 435-440 |
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| 作者姓名： | 韩立强 曹菁菁 付彤 魏占勇 王亚宾 杨国宇 |
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| 作者单位： | 1. 河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002
2. 河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;农业部动物生化与营养重点实验室,郑州450002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家重大星火计划项目 |
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| 摘 要： | 硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)是脂肪酸合成过程中的一个主要限速酶,为了研究奶牛脂肪合成的基因调控机制,本研究首先从奶牛组织中克隆得到4个不同长度的SCD基因启动子片段(分别为212、380、416和760bp),采用生物信息学的方法分析了启动子上不同的转录因子结合位点,将克隆片段与pGL3-basic荧光素酶报告基因载体进行KpnⅠ和XhoⅠ双酶切,连接形成重组启动子载体pGL3-SCD1、pGL3-SCD2、pGL3-SCD3和pGL3-SCD4。将载体纯化后,瞬时转染到HepG2细胞,对细胞施加胰岛素(10IU/mL)和亚油酸(120μm)处理,通过双荧光素酶报告基因检测启动子荧光素酶相对活性,结果发现,在SCD启动子序列上存在Sterol-regulated element(SRE)转录因子的结合位点,随着SCD启动子片段长度的延长,启动子活性也显著提高,pGL3-SCD4具有最高的启动子活性。与对照组相比,pGL3-SCD1~4启动子的活性在胰岛素刺激下都显著增强(P<0.05),其中pGL3-SCD4的启动子的相对活性最高,达到了46.93。在亚油酸刺激下,pGL3-SCD1~3的启动子活性没有显著变化,而pGL3-SCD4的活性显著减弱(P<0.05),研究表明pGL3-SCD4启动子上增加的片段(-398~-742)可能对于SCD基因的表达调控具有重要作用。
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| 关 键 词： | 奶牛 硬脂酰辅酶A去饱和酶 启动子 胰岛素 亚油酸 |
Cloning and Activity Analysis of Promoter of Bovine Stearoyl-CoA Desaturase Gene(SCD) |
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| HAN Li-Qiang , CAO Jing-Jing , FU Tong , WEI Zhan-Yong , WANG Ya-Bin , Yang Guo-Yu. Cloning and Activity Analysis of Promoter of Bovine Stearoyl-CoA Desaturase Gene(SCD)[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2013, 21(4): 435-440 |
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| Authors: | HAN Li-Qiang CAO Jing-Jing FU Tong WEI Zhan-Yong WANG Ya-Bin Yang Guo-Yu |
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| Affiliation: | 1,2* 1 College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China; 2 Key Laboratory of Animal Biochemistry and Nutrition, Ministry of Agriculture, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China |
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