| 砀山酥梨肉桂酸4-羟化酶基因的克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 程俊,程曦,盛玲玲,方志,张金云,金青,蔡永萍,林毅.砀山酥梨肉桂酸4-羟化酶基因的克隆及表达分析[J].农业生物技术学报,2016(11):1698-1708. |
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| 作者姓名： | 程俊 程曦 盛玲玲 方志 张金云 金青 蔡永萍 林毅 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036;2. 安徽农业大学生命科学学院,合肥230036;安徽省农业科学院园艺研究所,合肥230031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30771483，No.31171944和No.31640068)和安徽农业大学大学生科技创新基金(No.XJ2015258) |
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| 摘 要： | 木质素是梨(Pyrus)石细胞的重要成分之一,木质素合成代谢对石细胞形成发育有着重要影响.肉桂酸4-羟化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H,EC l.14.13.11)是细胞色素单加氧酶超家族中CYP73A亚家族的一员,同时为木质素合成代谢中的一个关键酶.本研究从砀山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Danshan Su)果实中克隆出一条肉桂酸4-羟化酶基因的全长cDNA序列,命名为PbC4H,GenBank登录号为:KF663548.PbC4H全长1 764 bp,具有1 515bp的ORF,编码504个氨基酸.PbC4H与多个物种C4H基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性,说明其在进化过程中较为保守.结构域分析表明,PbC4H具有跨膜结构域和典型的细胞色素P450结构域特征.qRT-PCR分析发现在梨果实发育的不同时期,PbC4H基因表达量呈现先增加后下降的趋势,其中在花后55 d达到最高.构建了PbC4H原核表达载体pET-32a-PbC4H,在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21菌株中诱导表达出PbC4H融合蛋白.亚细胞定位表明PbC4H蛋白定位于细胞膜上.本研究结果为利用分子生物学技术调控梨木质素的合成和石细胞的发育提供了基础资料.
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| 关 键 词： | 砀山酥梨 肉桂酸4-羟化酶 木质素 基因克隆 表达分析 |
Cloning and Expression Analysis of Cinnamate 4-hydroxylase Gene from Pyrus bretschneideri cv.Danshan Su |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pyrus bretschneideri cv Dangshan Su Cinnamate 4-hydroxylase Lignin Gene cloning Expression analysis |
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