| 一种基于无缝克隆构建重组杆状病毒的方法 |
| |
| 引用本文： | 钱月忠,郝雪敏,史翠萍,陈琴,何玉龙,陈健.一种基于无缝克隆构建重组杆状病毒的方法[J].蚕业科学,2017,43(2):275-281. |
| |
| 作者姓名： | 钱月忠 郝雪敏 史翠萍 陈琴 何玉龙 陈健 |
| |
| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018 |
| |
| 基金项目： | 浙江省高校生物学重中之重学科开放基金项目;浙江省公益技术应用研究项目 |
| |
| 摘 要： | 一些病毒复制过程涉及到断裂双链DNA的修复,主要有同源重组和非同源的末端连接2种修复形式。基于这种修复机制建立了构建重组杆状病毒的无缝克隆方法,采用该方法构建重组病毒的2个主要元件是:线性化的复制缺陷型杆状病毒载体和重组拯救DNA片段。杆状病毒载体经Bsu36Ⅰ酶切后产生2个末端,即切短了的orf1629 3'末端和细菌人工染色体(BAC)末端。其中,含克隆目的基因的重组拯救DNA片段通过同源臂同源重组修复病毒载体orf1629缺失的3'端序列,并通过细胞内的非同源末端连接修复细菌人工染色体片段(BAC)Kanr末端,从而使载体环化产生重组杆状病毒。应用该方法构建重组杆状病毒无需构建重组载体,无需进行重组后筛选,具有成本低、效率高的特点。
|
| 关 键 词： | 无缝克隆 线性化 重组杆状病毒 复制缺陷 重组拯救 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
