| BmMP54基因在家蚕组织的表达模式及与BmNPV多角体蛋白基因的融合表达分析 |
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| 引用本文： | 严婷婷,于滨,潘海涛,舒建洪,张耀洲.BmMP54基因在家蚕组织的表达模式及与BmNPV多角体蛋白基因的融合表达分析[J].蚕业科学,2017,43(4):587-593. |
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| 作者姓名： | 严婷婷 于滨 潘海涛 舒建洪 张耀洲 |
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| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018;浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划“863”项目;“十二五”国家科技重大新药创制专项 |
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| 摘 要： | 从家蚕蛹c DNA文库中筛选到一个403 bp的未知功能基因,将其命名为Bm MP54(Gen Bank登录号:DY231399.1)。该基因序列包含312 bp的开放阅读框,编码由103个氨基酸残基组成的蛋白质,生物信息学预测其含有2个跨膜区域,等电点及分子质量分别为9.90和10.463 k D。将Bm MP54与家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)的多角体蛋白基因(Polh)融合后分别连接到原核表达载体p GEX-4T-1和家蚕杆状病毒表达系统转移载体p Fast BacTMHTB中构建重组质粒,并分别在大肠埃希菌BL21(DE3)和家蚕卵巢培养细胞(Bm N)中表达。原核表达的融合蛋白通过调节p H值、阴离子交换层析等纯化获得了65 k D的重组融合蛋白Polh-Bm MP54,通过Western blotting可在重组杆状病毒感染的Bm N细胞中检测到42 k D左右的Bm MP54重组蛋白,表明已按设计要求高效表达并纯化获得目的蛋白质。实时荧光定量PCR分析显示Bm MP54在家蚕5龄幼虫的气门和脂肪体组织中表达量最高,在表皮和头部的表达量最低。上述研究结果有利于后续探讨Bm MP54在家蚕生长发育过程中的生物学功能。
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| 关 键 词： | 家蚕MP54基因 跨膜蛋白 家蚕核型多角体病毒多角体蛋白基因 融合表达 实时荧光定量PCR 表达谱 |
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