| 寄生疫霉ParA1蛋白在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 俞咪娜,邓晟,王颖,董汉松.寄生疫霉ParA1蛋白在毕赤酵母中的表达[J].江苏农业科学,2011(1). |
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| 作者姓名： | 俞咪娜 邓晟 王颖 董汉松 |
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| 作者单位： | 南京农业大学植物保护学院植物病理学系/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室,江苏南京,210095 |
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| 摘 要： | 本研究构建ParAl蛋白真核表达系统,通过诱导表达、镍柱纯化等途径,获得具有高生物学活性的ParA1蛋白.将末端含6×His-tag的parA1基因整合到酵母胞内表达质粒pPICZ-A上,获得重组表达质粒pPICZ-A::parA1-His.重组表达质粒用BstX I酶切线性化后,电转化至毕赤酵母菌KM71H中,经含抗生素Zeocin的平板、MD平板筛选和PCR分析,鉴定得到阳性克隆.甲醇诱导重组酵母菌中ParA1蛋白表达,然后用镍柱纯化表达产物.Tricine-SDS-PAGE电泳检测发现,纯化后收集的蛋白电泳条带清晰单一,浓度约为75 mg/L.生物学活性检测表明所得的ParA1蛋白有较高生物学活性,在稀释6 000倍后仍可以强烈诱导烟草产生过敏反应.
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| 关 键 词： | ParA1蛋白 毕赤酵母 蛋白表达 纯化 过敏反应 |
Expression of ParA1 of Phytophthora parasitica in Pichia pastoris |
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