杨树ARGONAUTE基因的克隆及序列分析

作为RNA诱导沉默复合体的核心元件,Argonaute(AGO)蛋白在植物生长发育过程中发挥着重要作用。以欧美杨和美洲黑杨不定根cDNA为模板,采用RT-PCR技术分离得到PeAGO 5 和PdAGO 5 基因的cDNA克隆,测序和序列分析结果表明2个目的cDNA片段均为2 809 bp, 基因内部含有完整的开放阅读框,可编码907个氨基酸,预测蛋白质分子量分别为102.31 ku和102.34 ku,理论等电点(pI)分别为9.34和9.7。所推导的2个氨基酸序列之间仅有7个差异位点,含有3个保守的结构域,DUF1785、 PAZ和Piwi结构域。它们与拟南芥AtAGO5蛋白的相似性分别为64.8%和64.3%,故将其命名为PeAGO5和PdAGO5。系统进化分析发现,PeAGO5和PdAGO5,与拟南芥AtAGO1,AtAGO5和AtAGO10蛋白同属一个进化分支。此外,采用实时定量PCR技术检测PeAGO 5 基因在杨树硬枝插穗不定根发育过程中的表达模式,推测该基因参与不定根发育调控。