| EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究 |
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| 引用本文： | 栾兆进,宋慧子,杜 炜,等.EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2020,48(5):9-16. |
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| 作者姓名： | 栾兆进 宋慧子 杜 炜 等 |
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| 作者单位： | 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室，内蒙古农业大学 动物科学学院,内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室，内蒙古农业大学 动物科学学院,内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室，内蒙古农业大学 动物科学学院 |
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| 基金项目： | 内蒙古自然科学基金项目（2018MS03012） |
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| 摘 要： | 【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P_4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P_4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P0.01),凋亡指数显著降低(P0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。
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| 关 键 词： | 表皮生长因子 附睾上皮细胞 绵羊 细胞增殖 叉头盒蛋白O1 |
| 收稿时间： | 2019/4/18 0:00:00 |
EGF promoting proliferation of sheep epididymal epithelial cells in vitro |
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| LUAN Zhaojin,SONG Huizi and DU Wei,et al.EGF promoting proliferation of sheep epididymal epithelial cells in vitro[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2020,48(5):9-16. |
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| Authors: | LUAN Zhaojin SONG Huizi and DU Wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | epidermal growth factor epididymis epithelial cells sheep cell proliferation forkhead box protein O1 |
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