非洲猪瘟病毒p17蛋白的哺乳动物细胞表达及鉴定 |
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引用本文: | 乔思娜,赵款,刘佳晨,李国新,童武,周艳君,赵冉,童光志,高飞,李丽薇.非洲猪瘟病毒p17蛋白的哺乳动物细胞表达及鉴定[J].畜牧与兽医,2023(3):68-73. |
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作者姓名: | 乔思娜 赵款 刘佳晨 李国新 童武 周艳君 赵冉 童光志 高飞 李丽薇 |
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作者单位: | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所;2. 河北农业大学动物医学院;3. 厦门市动物疫病预防控制中心;4. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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基金项目: | 广东省重点领域研发计划(2019B020211003);;国家自然科学基金ASFV专项(31941017); |
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摘 要: | 研究旨在利用哺乳动物细胞悬浮培养系统表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p17蛋白,纯化并免疫小鼠,制备针对ASFV p17蛋白的特异性多克隆抗体。根据GenBank中公布的ASFV SY18毒株p17蛋白编码基因序列,设计特异性引物扩增p17基因片段,构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-p17-strep。将其瞬时转染293i细胞,并利用下游strep标签进行蛋白纯化。纯化后的重组p17蛋白配合MnJ(β)胶体锰佐剂免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。利用Western blot、间接免疫荧光试验鉴定该多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示:本试验成功构建pCDNA3.1-p17-strep真核表达质粒,转染293i细胞后纯化获得重组p17蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体与真核表达的p17蛋白及表达ASFV p17蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒均有良好的特异性免疫反应。本试验为深入探讨ASFV p17蛋白的生物学功能奠定了基础。
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关 键 词: | 非洲猪瘟病毒 p17蛋白 293i细胞 多克隆抗体 |
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