虾肝肠胞虫水通道蛋白基因 EHP00_492 的克隆与表达特征分析

【目的】克隆虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei，EHP）水通道蛋白编码基因 EHP00_492，分析其在 EHP 成熟孢子中的表达特征，为研究 EHP 水通道蛋白的功能提供理论基础。【方法】以虾肝肠胞虫为材料，克隆获得完整的 EHP00_492 基因，对其进行序列特征分析，构建 pCold-TF-EHP00_492 重组表达载体，转化至大肠杆菌中异源表达重组蛋白，制备兔多克隆抗体。利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光实验分析 EHP00_492 在 EHP 成熟孢子中的表达定位特征。 【结果】 EHP00_492 的编码基因全长 729 bp，由 242 个氨基酸组成，富含亮氨酸，预测分子量为 25 kD，无信号肽，含有 6 个跨膜结构域，具有 MIP 蛋白家族结构域和 2 个水通道蛋白保守的 NPA/G 基序。此外，EHP00_492 与其他微孢子虫水通道蛋白序列同源性较高，系统进化树分析结果显示，EHP00_492 与毕氏肠胞虫 EBI_27080 蛋白亲缘关系最近。AlphaFold 分析发现，EHP00_492与已鉴定的家蚕微孢子虫水通道蛋白 NbAQP 和兔脑炎微孢子虫水通道蛋白 EcAQP 的蛋白质三维结构高度相似，推测 EHP00_492 是一个潜在的水通道蛋白。蛋白免疫印迹结果显示，EHP00_492 蛋白在 EHP 成熟孢子中有表达，分子量为 21 kD。亚细胞定位分析结果显示，EHP00_492 蛋白定位于 EHP 成熟孢子的孢壁上。【结论】初步明确了 EHP00_492 蛋白的序列特征、结构特征及其与其他微孢子虫水通道蛋白的亲缘关系，以及其在 EHP 成熟孢子中的表达定位特征，可为进一步研究 EHP 水通道蛋白的功能提供基础。

Cloning and Expression Characteristics Analysis of the Aquaporin Gene EHP00_492 from Enterocytozoon hepatopenaei