| 摘 要： | 【目的】分析狂犬病病毒(Rabies virus,RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体,为进一步研究RV与P75NTR的相互作用机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75NTR基因,选取P75NTR基因的418~681 nt和831~1080 nt两个区域(共513 nt,编码171个氨基酸),与p ET-32a(+)重组构建原核表达载体,然后转化BL21(DE3)感受态细胞进行表达,再以纯化的P75NTR重组蛋白免疫昆明小鼠制备抗P75NTR抗体,并以Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测其抗原性。【结果】以原核表达载体p ET-P75-513转化BL21(DE3)感受态细胞,经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h可获得较高表达量的P75NTR重组蛋白,且主要以可溶性蛋白形式进行表达,可用Ni-NTA树脂分离柱进行纯化。经Western blotting和IFA检测,发现制备获得的抗P75NTR抗体能与NA细胞表面自然的P75NTR及转染BHK-21细胞表达的P75NTR发生良好反应,且抗体效价高,可达1∶16000。【结论】原核表达的RV受体蛋白P75NTR抗原性强,免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性高,反应性良好。
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