| 牛结核分支杆菌MB1916c基因的克隆和原核表达 |
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| 引用本文： | 郝俊峰,赵德明.牛结核分支杆菌MB1916c基因的克隆和原核表达[J].中国农业大学学报,2006,11(6):1-6. |
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| 作者姓名： | 郝俊峰 赵德明 |
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| 作者单位： | 中国农业大学,动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室,北京,100094 |
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| 基金项目： | 博士后基金资助项目，国家重点基础研究发展计划项目(2005CB23000) |
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| 摘 要： | 构建牛结核分支杆菌MB1916 c的原核表达载体,获得了高纯度的融和表达蛋白。以牛结核分支杆菌DNA为模板,利用PCR方法扩增出牛结核分支杆菌MB1916 c基因片段,将回收纯化后的产物克隆到pGEM-T载体,测序分析鉴定为阳性的质粒,经SacⅠ/KpnⅠ双酶切后与同样条件下双酶切后的pET-30a( )载体连接,再转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,经菌落PCR快速筛选克隆,以SacⅠ/KpnⅠ双酶切和测序分析鉴定。确定正确的阳性菌株IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果显示:以牛结核分支杆菌DNA为模板,PCR后得到了MB1916 c目的基因片段,经克隆、亚克隆、序列分析和SacⅠ/KpnⅠ双酶切鉴定,获得了牛结核分支杆菌MB1916 c原核表达菌株,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约26 ku蛋白表达条带,West-ern-blotting分析证实所获得的蛋白具有牛结核分支杆菌的抗原性。本实验构建了pET-30a( )-MB1916 c原核表达载体,得到融合6个组氨酸残基的MB1916c蛋白纯度大于95%,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛结核分支杆菌 促复苏因子C MB1916c基因 原核表达 |
| 文章编号： | 1007-4333（2006）06-0001-06 |
| 收稿时间： | 2006-09-05 |
| 修稿时间： | 2006年9月5日 |
Cloning and prokaryotic expression of Mycobacterium bovis MB1916c gene |
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| Hao Junfeng,Zhao Deming.Cloning and prokaryotic expression of Mycobacterium bovis MB1916c gene[J].Journal of China Agricultural University,2006,11(6):1-6. |
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| Authors: | Hao Junfeng Zhao Deming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium bovis resuscitation promoting factor C MB1916c gene prokaryotic expression |
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