灰霉菌MyosinⅠ的体外表达纯化及抑制剂筛选 |
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引用本文: | 宋国红,刘松涛,李林蔚,刘飞,张峰.灰霉菌MyosinⅠ的体外表达纯化及抑制剂筛选[J].南京农业大学学报,2023(3):482-488. |
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作者姓名: | 宋国红 刘松涛 李林蔚 刘飞 张峰 |
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作者单位: | 1. 南京农业大学植物保护学院;2. 江苏省中国科学院植物研究所 |
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摘 要: | 目的]本文旨在体外表达纯化灰霉菌Ⅰ型肌球蛋白(MyosinⅠ)及筛选抑制剂。方法]采用SF9昆虫细胞蛋白表达系统表达灰霉菌MyosinⅠ(BcMyosinⅠ)马达结构域,用亲和层析和凝胶过滤层析纯化方法纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达情况。从实验室已有的化合物库中,用ATPase活性试剂盒测定化合物对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率。采用菌丝生长速率法测定部分化合物对灰霉菌的菌丝生长抑制活性。以禾谷镰刀菌Ⅰ型肌球蛋白(FgMyosinⅠ)三维结构为模板,同源模建预测BcMyosinⅠ三维结构。用AutoDock-Vina软件将部分化合物与BcMyosinⅠ进行分子对接。结果]成功在体外表达纯化BcMyosinⅠ。20μmol·L-1条件下,化合物B1和B17对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率分别为56.24%和65.39%,显著高于对照药剂氰烯菌酯对酶活性的抑制率(27.29%);B1和B17对灰霉菌的菌丝生长抑制率分别为32.90%和83.44%,显著高于对照药剂氰烯菌酯对菌丝生长的抑制率(1.06%)。对照药剂氰烯菌酯与...
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关 键 词: | 灰霉菌 MyosinⅠ 表达 纯化 抑制剂筛选 |
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