吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体的构建和酶学性质表征

根据茂源链霉菌谷氨酰胺转氨酶点突变的结果，用重叠延伸PCR法构建了3个吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe、Tyr360Ala，在巴斯德毕赤酵母GS115中表达并对其酶学特性进行了表征。结果表明，野生型和3个突变体的最适温度为40℃，最适pH 7；除了甘油外，其他有机试剂都降低了TGase的酶活力；与野生型相比，突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe和Tyr360Ala的比活力分别提高了9%、85%和30%;3个突变体与野生型相比，K_m、K_cat和K_cat/K_m值有所升高，表明突变可能降低了TGase与底物的亲和力，却加速了其催化效率。上述结果为通过点突变提高吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶酶活力提供了试验依据和途径。