禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索

应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C州成熟外膜蛋白H基因(ompm H)，将ompm H片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游，获得了重组表达质粒pGEX-ompm H。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)，当转化菌的D600nm值达到0．6～0．8时，对异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST-ompm H表达的最适条件。结果，当细菌的D600nm值为0．6～0．8时，IPTG最佳诱导浓度为0．8mmol／L，最佳诱导时间为4h，最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测。结果显示表达的融合蛋白GST-ompm H能与C48-1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应，证明pGEX-6p-1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。