柿果实内切–1,4–β–葡聚糖酶基因克隆与定量表达分析

 以成熟期‘富平尖柿’（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’）为材料，采用RT-PCR和RACE相结合的方法，克隆柿果实中内切–1,4–β–葡聚糖酶基因（EG）cDNA，并在此基础上采用实时荧光PCR定量技术检测采后常温下柿果及GA₃、ABA和1-MCP处理柿果软化过程中该EG基因转录水平的表达特点。试验结果：获得了一个内切–1,4–β–葡聚糖酶基因cDNA，命名为DKEG1（GenBank accession number：HQ222561），长2 011 bp，编码545个氨基酸，末端含有CBD区域。实时荧光PCR定量技术检测发现常温下对照组柿果采后3 d时出现DKEG1基因表达高峰，下降后又逐渐上升，并在12 d时出现第2个高峰；赤霉素明显抑制了柿果实在整个后熟过程中DKEG1基因的表达，尽管在6 d时也有升高，但与对照相比全程表达量均极低；ABA处理大大提高了DKEG1基因的表达量，没有出现采后3 d的表达高峰，但在6 ~ 18 d期间其表达量均高于对照的最高峰值，其表达高峰出现采后9 d；1-MCP处理的柿果表达高峰比对照推迟9 d，且前期表达量显著降低，但后期又上升。据此推断柿果实DKEG1的表达受乙烯生成和乙烯信号转导的调控，进而参与果实的后熟软化过程。