牛nanog基因原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达

从6周龄的胎牛（Bos taurus）原始生殖嵴中提取总RNA，通过RT-PCR扩增nanog基因，将其克隆到PMD-18T载体，然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上，获得原核表达质粒pGEX-KG-nanog，限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanDg基因编码序列。重组质粒转化大肠杆菌JM109（Escherichia coli），在不同的培养温度（25、30和37℃）和不同浓度的IPTG（0．10、0．25、0．50、1．00和2．00mmol／L）诱导下均获得了表达，结果表明，培养温度和IPTG浓度对GST-Nanog融合蛋白在大肠杆菌中的表达影响甚微；经Western blot检测证实该蛋白约60kD，并具有GST抗原活性，证实目的蛋白为Nanog蛋白。