| 禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 牛秀杰,赵妍,薛美,王云峰.禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立[J].黑龙江农业科学,2015(4):47-52. |
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| 作者姓名： | 牛秀杰 赵妍 薛美 王云峰 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(0302012009) |
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| 摘 要： | 为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明:该方法线性关系良好;敏感性能检测到10拷贝标准品;能特异性检测REV样品,不与其它禽相关病原发生交叉反应;板内、板间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法对人工感染REV的鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、腺胃和法氏囊进行初步检测,结果显示法式囊中的含量最高。
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| 关 键 词： | SYBR Green Ⅰ 实时荧光PCR 禽网状内皮增殖病毒 gag基因 LTR基因 |
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