大肠杆菌内猪生长激素cDNA基因表达产物的免疫电镜观察 |
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引用本文: | 张永清,林庆文,贾锋,齐顺章.大肠杆菌内猪生长激素cDNA基因表达产物的免疫电镜观察[J].华南农业大学学报,1992(Z1). |
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作者姓名: | 张永清 林庆文 贾锋 齐顺章 |
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作者单位: | 北京农业大学动物生化教研室
(张永清,贾锋),北京农业大学电镜室
(林庆文),北京农业大学动物生化教研室(齐顺章) |
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摘 要: | 本室构建的温度诱导高效表达猪生长激素(pGH)cDNA基因的工程;pPT15/N4830的表达效率为30%左右。相差显微镜下可见表达细菌内有包涵体(inclusion bodies, IBs)存在。高速离心(12000g,10min)pGH主要在沉淀内。由于细菌在某些条件下也能产生其他IB颗料,为了证实我们见到的IBs是由pGH的产生而形成的,以及pGH在大肠杆菌内的分布情况,我们用免疫胶体金技术对诱导后的大肠杆菌进行了观察。所用的一抗为本室制备的兔抗猪生长激素多克隆抗体(滴度为32000),使用时稀释100倍;所用的二抗是10nm金颗料标记的SPA(军事医学科学院陈德惠教授惠赠),使用时稀释20倍。其他操作按常规进行。结果表明:1.大肠杆菌内产生的pGH以IBs的形式存在,IBs的大小不一,平均每个细菌内有3~4个IBs。2.IBs以外没有观察到pGH的存在,这与破细胞离心后上清的免疫印渍(Western blotting)结果相吻合。3.与文献报道的免疫酶标技术相比,用免疫胶体金技术观察的结果更加清晰。方法简便,容易掌握。
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关 键 词: | 大肠杆菌 猪生长激素 cDNA 免疫电子显微术 |
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