以beta-tubulin基因为选择标记的淡紫紫孢菌遗传转化

目的]建立稳定的食线虫真菌淡紫紫孢菌遗传转化体系，并获得插入突变体。方法]介导的方法，以淡紫紫孢菌20-7的分生孢子为受体，将新构建的携带beta tubulin基因的质粒转化进入淡紫紫孢菌的细胞中，通过优化诱导乙酰丁香酮(AS)的浓度、诱导培养时间、农杆菌终浓度OD₆₆₀值、共培养AS的浓度、共培养时间和共培养温度等因子，建立高效遗传转化体系，获得致病力不同的突变体。结果]共培养过程中使用萌发孢子是成功建立淡紫紫孢菌遗传转化体系的必要条件；淡紫紫孢菌萌发的孢子与农杆菌EHA105在25℃共振荡培养48 h时，且在共培养阶段当乙酰丁香酮浓度为200μg·mL^-1(pH5.5)时转化效率最高，转化效率为1 200～3 200个转化子/10⁶分生孢子，阳性抗性转化子比率为96%；转化子PCR表明，T-DNA已整合到淡紫紫孢菌的基因组中；Southern杂交验证表明，83.3%的转化子为T-DNA单拷贝插入；成功建立了可靠的淡紫紫孢菌的遗传转化体系，并从20个转化子中筛选到16个致病力变异的突变体。结论]本研究成功构建...