| 微小隐孢子虫cDNA文库的构建与免疫学筛选 |
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| 引用本文： | 高依然,张 静,韩福松.微小隐孢子虫cDNA文库的构建与免疫学筛选[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(8):7-12. |
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| 作者姓名： | 高依然 张 静 韩福松 |
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| 作者单位： | 吉林大学 人兽共患病研究所，人兽共患病研究教育部重点实验室;吉林大学 人兽共患病研究所，人兽共患病研究教育部重点实验室;吉林大学 人兽共患病研究所，人兽共患病研究教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家“十一五”传染病重大专项（2008ZX10004-011）；国家自然科学基金项目(31025025，31272549) |
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| 摘 要： | 【目的】构建微小隐孢子虫cDNA文库,以筛选出可替代天然抗原用于诊断的重组抗原。【方法】首先纯化微小隐孢子虫卵囊,用Trizol Reagent提取总RNA,构建全长cDNA;分别用蛋白酶K与Sfi消化、酶切处理cDNA,采用Column Spin H-1000分离柱分离cDNA,连接λTriplEx2载体,构建cDNA文库。扩增cDNA文库,用兔抗微小隐孢子虫血清作探针对cDNA文库进行初筛和复筛,将复筛得到的阳性克隆连接PMD18-T载体,测序后进行序列比对。【结果】微小隐孢子虫cDNA文库噬菌斑插入片段长度为1.5kb左右,库容大于107。经过筛选共获得了20个微小隐孢子虫阳性克隆,测序后从中选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,分别为MUCIN蛋白、乳酸脱氢酶、微管相关蛋白和子孢子抗原蛋白。【结论】成功构建了微小隐孢子虫cDNA文库,并筛选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,为隐孢子虫的血清学诊断提供了重组抗原。
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| 关 键 词： | 微小隐孢子虫 cDNA文库构建 免疫学筛选 |
| 收稿时间： | 2012/11/23 0:00:00 |
Construction and immunoscreening of cDNA library of Cryptosporidium parvum |
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| GAO Yi-ran,ZHANG Jing,HAN Fu-song,LU Hui-jun,JIANG Ning,CHEN Qi-jun,YIN Ji-gang.Construction and immunoscreening of cDNA library of Cryptosporidium parvum[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(8):7-12. |
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| Authors: | GAO Yi-ran ZHANG Jing HAN Fu-song LU Hui-jun JIANG Ning CHEN Qi-jun YIN Ji-gang |
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| Institution: | (Laboratory for Zoonosis Research,Ministry of Education,Institute of Zoonosis,Jilin University,Changchun,Jilin130062,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cryptosporidium parvum cDNA library construction immunological screening |
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