拟南芥细胞色素P450 94B3-N25的原核表达

为拟南芥细胞色素P450 94B3-N25的优化表达和纯化,利用原核表达技术,成功在大肠埃希菌内表达了拟南芥细胞色素P450 94B3-N25。首先,用热激转化方法将载体pMAL-c2x-IPN-CYP94B3-N25转入Rosseta,利用菌落PCR挑选阳性克隆,设置交叉试验,摸索最适表达温度和时间表达目的蛋白,并在450nm处利用分光光度法测定菌液里有目的蛋白的表达。破碎细胞后,提取细胞总蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示目的蛋白表达成功,但蛋白质变性。