| 山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 赵华,杨照海,刘平,卢晟盛,卢克焕,毕方方,郑喜邦.山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化[J].农业生物技术学报,2010,18(5). |
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| 作者姓名： | 赵华 杨照海 刘平 卢晟盛 卢克焕 毕方方 郑喜邦 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科技学院,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 广西区自然科学基金项目，广西亚热带生物资源保护利用重点实验室开放课题，广西大学科研基金项目 |
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| 摘 要： | 本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白.用RT-PCR方法从山羊(Capra hircus)肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒.DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320 bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为99.2%.将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc.经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75 kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带.Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别.本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞(induced pluripotent stem cells)检测创造了条件.
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| 关 键 词： | 山羊 c-Myc基因 分子克隆 原核表达 蛋白纯化 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Goat c-Myc Proto-oncogene,and Purification of GST-Myc Fusion Protein |
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| Zhao Hua,Yang Zhaohai,Liu Ping,Lu Shengsheng,Lu Kehuan,Bi Fangfang,Zheng Xibang.Cloning and Prokaryotic Expression of Goat c-Myc Proto-oncogene,and Purification of GST-Myc Fusion Protein[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2010,18(5). |
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| Authors: | Zhao Hua Yang Zhaohai Liu Ping Lu Shengsheng Lu Kehuan Bi Fangfang Zheng Xibang |
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