| 摘 要： | 为研制猪瘟（CSF）与口蹄疫（FMD）二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白（r E2）的表达与纯化效果,采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体（MAb）的反应原性。结果显示,在约50 ku处出现目的蛋白条带,纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明,r E2获得了表达且纯化效果较好,反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒（FMDV）O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗,将小鼠分为4组：CSFV E2+FMDV（20μg+1μg）组、CSFV E2（20μg）组、FMDV（1μg）组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄～8周龄的各组雌性BALB/c小鼠,首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平;利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3+/CD4+T淋巴细胞、CD3+/CD8+T淋巴细胞和CD19+B淋巴细胞的占比;采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示,与PBS组相比,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高（P<0.05、P<0.01、P<0.0001）;E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异（P>0.05）。流式细胞术结果显示,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3+/CD4+T淋巴细胞、CD3+/CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组（P<0.05、P<0.01、P<0.0001）;E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异;与FMDV组相比,E2+FMDV组小鼠CD3+/CD4+T淋巴细胞的占比极显著升高（P<0.01）,而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示,3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组（P<0.05、P<0.01）,E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明,E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当,CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上,本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗,为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。
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