斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒的巢式PCR检测

旨在建立一种快速、可靠的斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒(Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus, SpltNPV)的分子检测方法，以克服目前常规PCR技术很难检测到斜纹夜蛾成虫带病毒的缺陷。以SpltNPV的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,egt)基因为检测对象，基于该基因序列设计了巢式PCR引物，其中一对外侧引物egt-F/R和一对内侧引物egt1-F/R，并研究斜纹夜蛾成虫带毒的巢式PCR检测可靠性。结果表明：基于egt基因的巢式PCR方法可以特异性扩增SpltNPV的DNA，引物egt-F/R的扩增检测最低限为10-7μg/μL；且基于引物egt-F/R的两轮普通PCR无法检测出成虫带毒，而采用巢式PCR方法可有效扩增出目的egt片段，巢式PCR检测方法的灵敏度比两轮普通PCR检测方法提高2个数量级。因此，本研究成功建立了基于SpltNPV的egt基因的巢式PCR检测技术，该方法为斜纹夜蛾成虫带毒、传毒等流行病学研究提供了可靠的技术支撑。