| 非洲猪瘟病毒一步法巢式锁核酸荧光定量PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 施科达,徐民生,李艳,张昆丽,翟少伦,勾红潮,宋帅,杨冬霞,臧莹安,孙铭飞,李春玲.非洲猪瘟病毒一步法巢式锁核酸荧光定量PCR方法的建立[J].中国农学通报,2023(11):143-151. |
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| 作者姓名： | 施科达 徐民生 李艳 张昆丽 翟少伦 勾红潮 宋帅 杨冬霞 臧莹安 孙铭飞 李春玲 |
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| 作者单位： | 1. 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站;2. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心/仲恺农业工程学院动物科技学院 |
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| 基金项目： | 广东省重点领域研发计划资助(2019B020211005,2019B020217002)； |
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| 摘 要： | 试验基于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)B646L(P72)蛋白基因序列，建立一种高灵敏度和高特异性的检测方法。采用Oligo 7软件设计一步法巢式锁核酸荧光定量PCR(One Step NestedLocked Nucleic Acid real-time PCR,LNA-OSN-PCR)的嵌套引物以及探针，并对外引物进行锁核酸修饰。建立并优化LNA-OSN-PCR反应体系和条件，确立LNA-OSN-PCR标准曲线，并检验LNA-OSN-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。采用LNA-OSN-PCR方法，对96份临床疑似患病样品进行检测，同时与普通荧光探针PCR方法进行比较。试验确立并优化了LNA-OSN-PCR的反应条件和体系，建立的LNA-OSN-PCR标准曲线，具有较好的线性(R2=0.9945)。该方法的最低检测限为3×10-1copies/μL，变异系数小于3%，并且与其他病毒或细菌核酸无交叉反应。LNA-OSN-PCR方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法比较，检测灵敏度提高10～100...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 B646L(P72)蛋白基因 锁核酸修饰 一步法巢式荧光定量PCR |
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