PMSG免疫学检测方法的建立

为了建立一种马属动物孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)浓度的检测方法,试验使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测商用PMSG抗原纯度,斑点印迹杂交(Dot-blot)判断PMSG和抗体是否结合,蛋白免疫印迹杂交(Western-blot)确定抗体和PMSG抗原的结合方式,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)建立PMSG浓度-吸光度值标准曲线,并拟合方程。结果表明:PMSG抗原纯度符合要求,抗体与PMSG抗原采用空间表位方式结合;PMSG浓度与OD_(450)值的标准曲线拟合方程为y=0.004 5x+0.020 2,R~2=0.998,在0～4×10~2IU/m L范围内,PMSG浓度与OD_(450)值之间高度相关,R~20.99。说明PMSG抗原可与抗体通过空间表位方式特异性结合,所建立的PMSG免疫学检测方法具有较高的准确性。