禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达 |
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引用本文: | 任红玉,谢芝勋,谢丽基,王盛,黄娇玲,范晴,罗思思,张艳芳,曾婷婷,张明秀,谢志勤,邓显文.禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达[J].黑龙江畜牧兽医,2019(14). |
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作者姓名: | 任红玉 谢芝勋 谢丽基 王盛 黄娇玲 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张明秀 谢志勤 邓显文 |
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作者单位: | 广西大学动物科学技术学院;广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室 |
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摘 要: | 为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARV S2基因序列(登录号为KF741763. 1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到p MD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24 h后收取蛋白质,通过Western-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。
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