猪带绦虫TS018基因真核表达载体的构建及其表达 |
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引用本文: | 袁改玲,才学鹏,景志忠,郑亚东,骆学农,郭爱疆.猪带绦虫TS018基因真核表达载体的构建及其表达[J].中国兽医科技,2005,35(7):529-532. |
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作者姓名: | 袁改玲 才学鹏 景志忠 郑亚东 骆学农 郭爱疆 |
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摘 要: | 采用PCR从重组克隆载体pGEM—TSO18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSO18基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9k相连接,构建重组表达载体pPIC9k—TSO18,转化大肠埃希氏菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。制备重组质粒pPIC9k—TSO18,用SalⅠ线性化,并电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到高拷贝重组菌株,以甲醇进行诱导表达,SDS—PAGE和Western-blotting分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出具有反应活性的16ku重组蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的80%以上,诱导72h目的蛋白表达量为0.5mg/mL。
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关 键 词: | 猪带绦虫 TSO18基因 毕赤酵母 诱导表达 |
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