双重荧光定量PCR杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MON89034

本研究创建一种简单快捷、成本低廉、灵敏准确及可靠性强的高通量鉴定转基因玉米MON89034转化体的快速检测方法。采用多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对转基因玉米MON89034品系进行检测，并针对转基因玉米MON89034靶标基因设计高效稳定的引物和探针，使用zSSIIb基因作为内源基因，避免检测出现假阴性，将反应体系及条件优化后，用实时荧光定量PCR仪进行扩增，初步建立转基因玉米MON89034双重实时荧光PCR检测方法，通过对该方法进行特异性和大样本可靠性测试验证，继而创建出一种高通量鉴定转基因玉米MON89034转化体的检测方法。通过建立的双重荧光定量PCR方法对转基因玉米、非转基因玉米和转基因大豆的DNA混合模板检测得出的结果表明，多种作物DNA混合模板可在单根PCR反应管内实现对zSSIIb基因和MON89034的同时检测，并在2 h内完成检测得到准确结果。目前，建立的该双重实时荧光PCR方法可用于多个转基因作物样品间快速筛查，检测快速，结果准确，可满足大多数检测机构日常检测的需求。