海南油茶SCoT反应体系建立与多态性引物筛选

SCoT-PCR是一种单引物扩增分子标记。为了将SCoT分子标记应用于海南油茶的分子鉴定和遗传多样性评价中，本研究采用单因素试验和正交试验结合方法，分析模板DNA、dNTPs、Taq DNA聚合酶及引物4种因素对海南油茶SCoT-PCR扩增结果的影响，构建海南油茶SCoT-PCR体系，并筛选多态性引物。单因素试验结果表明：DNA浓度对海南油茶扩增效率影响不大，高浓度dNTPs利于扩增产物，而Taq酶和引物扩增高效率偏于中浓度。正交试验结果表明：各因素对海南油茶SCoT-PCR扩增影响大小依次为引物>Taq DNA聚合酶>dNTPs>模板DNA；总体系为20μL时，最佳反应体系中模板DNA用量为30 ng,dNTPs浓度为0.30 mmol/L，引物浓度为0.60μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.00 U。利用构建的SCoT-pcr体系对80条SCoT单引物进行筛选，最终筛选出16条SCoT条带清晰的多态性引物，多态性比率平均值达到76.25%。本试验结果可为海南油茶的遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究提供参考数据。