罗伦隐球酵母B40脂肪酶的分离纯化及N端测序

文章介绍了罗伦隐球酵母B40所产脂肪酶的分离纯化过程,摸索了分离纯化过程中盐析的最佳盐浓度和作用时间,并对离子交换填料进行了选择,确定了纯化效果好的填料及其缓冲体系的pH,同时也对该酶N端序列进行了测定。结果表明,在4℃,65%硫酸铵饱和度的条件下沉淀6h能获得蛋白量较大、活性较高的目的蛋白。将样品过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱,缓冲体系为pH9.020mol·L-1Tris-HCl溶液中进一步洗脱后进行超滤浓缩、纯化得到单一脂肪酶,该脂肪酶的N端蛋白序列为:D-F-G-P-I-T-I-Y-T-P-P-A。