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| 猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 高超,肖冲,高瑞峰,胡桂学.猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立[J].安徽农业科学,2010,38(32):18224-18226. |
| 作者姓名： | 高超 肖冲 高瑞峰 胡桂学 |
| 作者单位： | 1. 吉林农业大学发展学院动物科技学院,吉林长春,130600 2. 吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春,130062 3. 吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春,130118 |
| 基金项目： | 吉林省牧业局项目(20040624); 吉林农业大学博士启动基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的]建立一种检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。方法]从已构建的克隆质粒pMD-ORF2上酶切回收ORF2基因的羧基端部分ORFc片段,克隆到pGEX-6P-1表达载体上,构建原核表达质粒pGEX-ORFc,转化入大肠杆菌BL21进行原核表达,用Western-blot法检测纯化蛋白,将其作为抗原包被酶标板,优化间接ELISA试验条件,从而建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果]重组表达质粒的酶切鉴定证明已成功构建重组表达质粒pGEX-ORFc,其在E.coliBL21中诱导5、6 h时表达效果最好。纯化后的蛋白条带与原重组菌位置一致均在40.0 kD处,证明重组蛋白得到良好纯化。试验确定抗原最佳包被浓度为12.85μg/m l,血清稀释度为1∶40。3次重复检测表明,变异系数最大为7.12%。结论]建立的ELISA方法对检测PCV2感染具有良好的特异性及重复性。 |
| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 原核表达 ELISA |
Establishment of an Indirect ELISA for PCV2 Recombinant Capsid Protein Expressed in E. coli |
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| GAO Chao et al.Establishment of an Indirect ELISA for PCV2 Recombinant Capsid Protein Expressed in E. coli[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2010,38(32):18224-18226. | |
| Authors: | GAO Chao |
| Institution: | GAO Chao et al (College of Animal Science , Technology,Development College of Jilin Agricultural University,Changchun,Jilin 130600) |
| Abstract: | Objective] The study aimed to establish an indirect ELISA for determining the serum antibody against PCV2.Method] The ORFc fragment from ORF2 gene recovered through the enzyme digestion on the constructed cloning plasmid pMD-ORF2 was cloned and inserted into the prokaryotic expression vector pGEX-6P-1 so as to construct the recombinant plasmid pGEX-ORFc which was transferred into E.coli BL21 for the prokaryotic expression,the inclusion body of recombinant protein was purified and its purified protein was ... |
| Keywords: | Porcine circovirus type 2 Prokaryocyte expression ELISA |
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