军曹鱼MHC-Ⅱα基因全长cDNA的克隆及其组织表达分析

本研究根据其他鱼类MHC-Ⅱα基因的保守序列设计兼并引物，运用同源克隆和末端快速扩增方法扩增了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的全长cDNA序列，并对cDNA及其氨基酸序列进行了分析，比较了军曹鱼和其他物种的MHC-Ⅱα氨基酸序列的差异，分析了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的组织分布及经LPS刺激后头肾组织中MHC-Ⅱα基因的表达变化。结果表明，军曹鱼MHC-Ⅱα cDNA全长998 bp，包括53 bp的5′末端非编码区（5′UTR）、234 bp的3′末端非编码区（3′UTR）及711 bp的开放阅读框（ORF），编码236个氮基酸，其蛋白质分子质量约为25.94 ku，等电点为4.39；军曹鱼MHC-Ⅱα蛋白质序列具有一些重要的特征，包括前导肽、α1、α2、CP/TM/CYT区和保守的半胱氨酸等；军曹鱼MHC-Ⅱα与鼠、人及其它鱼类的氨基酸同源性在25.0%～69.5%之间。Real-time PCR检测结果显示，MHC-Ⅱα基因在正常军曹鱼组织中均有表达，但其表达量在各种组织中存在差异，其中较强表达于头肾、鳃，中等程度表达于脾脏、肠，在心脏、脑、肌肉中表达较弱；经LPS刺激后，头肾中MHC-Ⅱα基因表达下调。