猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶重组蛋白的酶活性和免疫原性检测

克隆表达猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（IMPDH）编码全基因，分析表达产物的免疫原性，并测定其酶活性。采用PCR法，从四川资阳中毒性休克综合征病人分离株05ZYH33基因组扩增IMPDH的编码基因impdh，构建重组表达质粒pET28a-impdh，转化E.coli BL21(DE3)，筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达，产物通过SDS-PAGE鉴定，并用western blot检测其抗原活性；最后对表达产物进行亲和层析纯化，测定其在不同pH、温度下的酶活性。impdh基因在原核细胞中得到高效表达，在最适温度和pH下具有最强酶活性。我国猪链球菌2型毒力株05ZYH33含有impdh基因，在原核系统高效表达的重组蛋白具有良好的免疫原性和酶活性。