| 日本脑炎病毒弱毒疫苗株全长cDNA的体外合成及恢复病毒的拯救 |
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| 引用本文： | 蒋春英,;魏建超,;钟登科,;朱紫祥,;武专昌,;史子学,;邵东华,;李蓓蓓,;马志永. 日本脑炎病毒弱毒疫苗株全长cDNA的体外合成及恢复病毒的拯救[J]. 兽医大学学报, 2014, 0(7): 1106-1111 |
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| 作者姓名： | 蒋春英, 魏建超, 钟登科, 朱紫祥, 武专昌, 史子学, 邵东华, 李蓓蓓, 马志永 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241; [2]上海农林职业技术学院动物科学系,上海201600 |
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| 基金项目： | 国家国际科技合作项目（2010DFB33920）; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（2013JB08）; 上海农林职业技术学院院级科研项目（091227） |
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| 摘 要： | 将病毒的全基因组分成3个重叠的区段分别扩增出来,把这3个片段连接到载体中。以这3个片段为模板,通过融合PCR方法,获得JEV的全长cDNA。以cDNA为体外转录的模板,体外转录获得病毒mRNA,转染BHK-21细胞,拯救JEV病毒。通过生物学特性、分子生物学、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定,并测定恢复病毒的生长曲线和LD50。结果显示,获得了全长cDNA,体外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞后,二代恢复病毒可引起明显的细胞病变,间接免疫荧光试验和RT-PCR均为阳性。空斑试验表明,拯救病毒与原病毒空斑表型类似;恢复病毒与亲本毒相比在BHK-21细胞上生长更快;恢复病毒的LD50与亲本毒类似。
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| 关 键 词： | 日本脑炎病毒 全长cDNA 体外转录 反向遗传 |
Amplification of Japanese encephalitis virus complete cDNA and the generation of the recombinant Japanese encephalitis virus |
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| Affiliation: | JIANG Chun-ying , WEI Jian-chao , ZHONG Deng-ke, ZHU Zi-xiang, WU Zhuan-chang , SHI Zhi xue , SHAO Dong-hua , LI Bei-bei, MA Zhi-yong(1. Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China ; 2. Department of Animal Sci- ence and Technology, Shanghai Vocational and Technical College of Agriculture and Forestry, Shanghai 201600, China) |
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