猪流行性腹泻病毒G2a变异株CH-HK-2021的分离鉴定及其遗传进化分析

【目的】明确猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点，为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞（Vero）上进行PEDV分离，分别采用间接免疫荧光试验（IFA）、 Western blotting、 RT-PCR和电镜观察进行鉴定，通过TCID50测定病毒滴度及绘制病毒体外增殖动态曲线；将分离毒株基因组分成33段进行RT-PCR扩增，使用Lasergene中的SeqMan拼接序列，然后以MEGA 7.0进行遗传进化分析，并以Protean中的Jameson-Wolf算法进行抗原性分析。【结果】其中1份PEDV阳性仔猪肠道组织样品在Vero细胞上盲传至第6代时出现典型的细胞病变，将其命名为CH-HK-2021毒株； IFA和Western blotting鉴定结果表明CH-HK-2021毒株能与小鼠抗PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应，且RT-PCR能扩增获得预期的目的条带，证实分离毒株即为PEDV。CH-HK-2021毒株的直径在80~120 nm，且病毒粒子表面带有刺突样的形状，属于冠状病毒；其在Vero细胞上能稳定传代，目前已传至100代。CH-HK-2021毒株在感染Vero细胞24 h后，其病毒滴度达最高值，为105.6 TCID₅₀/mL。CH-HK-2021毒株全基因组除去poly （A）尾结构为28034 bp，与PEDV参考株在全基因组水平上的核苷酸序列相似性为96.0%~98.9%，与参考毒株S基因核苷酸序列的相似性为93.1%~99.0%，其中与变异株CH/JX/01（KX058031）的核苷酸序列相似性最高，与经典毒株AVCT12（LC053455）的核苷酸序列相似性最低。CH-HK-2021毒株属于G2a变异株，为我国当前的流行毒株。G2a毒株与G2b变异株在S基因上存在42个核苷酸差异位点，在S蛋白上则存在6处抗原性差异位点，且主要的差异位点位于S2亚基上。【结论】分离获得的CH-HK-2021毒株属于PEDV G2a变异株，为我国当前的流行毒株，与PEDV经典毒株的亲缘关系相对较远。G2a毒株和G2b变异株在S2亚基上存在多处抗原性差异位点，故推测S2亚基是导致G2a毒株与G2b变异株抗原性差异的主要原因。