| 利用真核表达的猪流感病毒NP蛋白制备其特异性的单克隆抗体 |
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| 引用本文： | 郭利敏,乔传玲,陈艳,杨焕良,张健,辛晓光,陈化兰.利用真核表达的猪流感病毒NP蛋白制备其特异性的单克隆抗体[J].中国预防兽医学报,2010,32(6). |
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| 作者姓名： | 郭利敏 乔传玲 陈艳 杨焕良 张健 辛晓光 陈化兰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 哈尔滨市科技攻关计划项目 |
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| 摘 要： | 为制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究将重组质粒pMD-NP中含有的SIVNP基因亚克隆于pCAGGS真核表达质粒中,获得重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得了表达。将pCAGGS-NP以100μg/只剂量免疫4周龄～5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤细胞融合技术获得1株稳定分泌抗SIVNP的MAb杂交瘤细胞株(3D7);该MAb经Ig亚类鉴定为IgM,轻链为κ链,其诱导小鼠产生的腹水ELISA效价为1:105;纯化3D7腹水并对其进行亲和力及抗原结合活性的测定,ELISA曲线图显示亲和力常数为1.02×106M-1,IFA结果显示其可与H1N1、H3N2、H9N2亚型SIV发生特异性反应,具有良好的反应活性。该MAb的制备将为进一步建立猪流感的诊断方法以及分析NP蛋白抗原表位等方面的研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 核蛋白基因 真核表达 单克隆抗体 |
Preparation of the monoclonal antibodies using swine influenza virus NP protein expressed by eukaryotic expression vector |
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| GUO Li-min,QIAO Chuan-ling,CHEN Yan,YANG Huan-liang,ZHANG Jian,XIN Xiao-guang,CHEN Hua-lan.Preparation of the monoclonal antibodies using swine influenza virus NP protein expressed by eukaryotic expression vector[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2010,32(6). |
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| Authors: | GUO Li-min QIAO Chuan-ling CHEN Yan YANG Huan-liang ZHANG Jian XIN Xiao-guang CHEN Hua-lan |
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