柔嫩艾美耳球虫MIF基因克隆及生物信息学分析

【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)基因CDS区，探究其生物信息学特征，为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定，根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列，利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区，构建pET28a-EtMIF重组质粒，经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析；利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列，全长348 bp,共编码115个氨基酸，相对分子质量为1.203×10⁴。系统进化树结果表明，柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近，相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白，亚细胞定位主要在细胞质中，共有10个磷酸化位点；含有1个保守结构域，二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成，...