| DDX1影响猪流行性腹泻病毒复制的机制研究 |
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| 引用本文： | 霍明凯,关飞虎,邱润辉,魏春燕,于海涛,朱嘉乐,张辉.DDX1影响猪流行性腹泻病毒复制的机制研究[J].中国畜牧兽医,2023(4):1556-1566. |
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| 作者姓名： | 霍明凯 关飞虎 邱润辉 魏春燕 于海涛 朱嘉乐 张辉 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院;2. 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室;3. 动物健康养殖国家国际联合研究中心 |
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| 基金项目： | 新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划(2021AB01202)；;国家自然科学基金(31860691)； |
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| 摘 要： | 【目的】探究RNA解旋酶DEAD-box家族蛋白DDX1在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染猪回肠上皮细胞(IPI-2I)期间发挥的作用，为揭示DDX1的生物学功能奠定基础。【方法】参照GenBank中猪源DDX1基因序列(登录号：XM＿021087822.1),设计特异性引物PCR扩增DDX1基因全长并连接至pMD19-T克隆载体，双酶切鉴定成功后连接至pcDNA3.1表达载体；连接产物转化后筛选阳性菌落；培养IPI-2I细胞，取传代2次的细胞铺于6孔板内进行后续试验，将阳性菌落的重组质粒转染至6孔板培养24 h后收集蛋白质，Western blotting检测DDX1转染效率；以感染复数(MOI)为1.0的PEDV感染已转染pcDNA3.1-DDX1或PBS(对照)的IPI-2I细胞，建立PEDV感染细胞模型，PEDV感染12 h后分别收集细胞总蛋白质和RNA;间接免疫荧光试验检测细胞水平上PEDV N蛋白的表达，实时荧光定量PCR检测PEDV N基因mRNA表达水平，Western blotting检测PEDV N蛋...
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| 关 键 词： | DDX1 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 磷酸化 |
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