| 基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠 |
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| 引用本文： | 沙芳芳,范沛,杨培长,张璐,李建科.基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp1基因敲入小鼠[J].中国畜牧兽医,2023(11):4392-4402. |
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| 作者姓名： | 沙芳芳 范沛 杨培长 张璐 李建科 |
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| 作者单位： | 1. 河南工业大学生物工程学院;2. 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(32070742)； |
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| 摘 要： | 【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后，在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术，将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵，制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp1基因定点敲入小鼠，并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵，持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp1+/+)小鼠，比较不同时间收缩压和舒张压，以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配，产生杂合子(Mrjp1+/-)小鼠，对Mrjp1+/-小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示，Mrjp1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp1+/-小鼠之间交配产生WT、Mrjp1+/-
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 小鼠 基因敲入 蜂王浆主蛋白1 血压调节 |
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